Os ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas que permitem que sejam isolados e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Com relação às técnicas de extração e purificação das moléculas de ácidos nucleicos (DNA ou RNA), assinale a alternativa INCORRETA:
Questão
Os ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas que permitem que sejam isolados e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Com relação às técnicas de extração e purificação das moléculas de ácidos nucleicos (DNA ou RNA), assinale a alternativa INCORRETA:
Alternativas
A) A segunda etapa envolve a separação do DNA dos outros componentes celulares, como as proteínas.
B) A extração do DNA ou RNA ocorre por meio da lise ou quebra das membranas celulares.
C) Alternativamente, são usados solventes orgânicos, em vez de altas concentrações de sais (fenol e/ou o clorofórmio), que auxiliam na degradação das proteínas.
D) A purificação das moléculas de DNA ou RNA ocorre por meio da inclusão de outros componentes celulares, como proteínas, e de lavagens específicas.
Explicação
Na extração e purificação de ácidos nucleicos (DNA/RNA), em geral ocorrem etapas clássicas:
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Lise celular: rompe membranas plasmática e nuclear para liberar DNA/RNA. Portanto, a alternativa B está correta.
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Separação do DNA/RNA de outros componentes celulares (principalmente proteínas e lipídeos): isso é feito por digestão proteica (ex.: proteinase K), uso de sais/álcool para precipitação, ou ainda por extração com solventes orgânicos. Assim, a alternativa A também está correta ao indicar essa separação.
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Remoção de proteínas por solventes orgânicos: o uso de fenol e/ou clorofórmio (solventes orgânicos) é uma abordagem clássica para remover proteínas, que ficam preferencialmente na fase orgânica/interfase, enquanto os ácidos nucleicos ficam na fase aquosa. Logo, a alternativa C está essencialmente correta ao citar fenol/clorofórmio como auxiliares na remoção/degradação/inativação de proteínas.
Já a purificação de DNA/RNA não ocorre por “inclusão” de proteínas; ocorre justamente pelo afastamento/remoção de proteínas e demais contaminantes, seguido de lavagens (por exemplo, em colunas de sílica) para manter apenas os ácidos nucleicos. Portanto, a alternativa D é a incorreta, pois afirma o contrário do objetivo da purificação.
Alternativa correta: (D).
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